尽管PPD引起的脂肪细胞显着的抑制作用，我们不能推断出人类直接从我们目前的研究其作用。因为我们知道，脂肪细胞分化调控方式有两种：humorally和neuronally。除了从脂肪组织（9）直接影响急诊，PPD公司也可能会影响下丘脑神经元ERα的发挥了作用，在控制能量平衡，维持正常体重（14 33），调制食欲或能源开支（ 9）。另一个原因是，在本研究中的所有数据都基于对小鼠细胞。有研究表明，通过研究小鼠脂肪细胞分化得到的数据并不总是可以推断人体脂肪细胞（17，43）。因此，对人体脂肪细胞分化的PPD的影响尚未决定要在未来的研究。

总之，PPD导致3T3-L1前脂肪细胞的postclonal扩张和随后分化成脂肪细胞的抑制，部分地改变雌激素受体α亚型的表达模式，也可以阻断p38 MAPK通路参与。此外，PPD公司似乎主要在脂肪细胞分化的早期阶段采取行动。

另一个应该解决的问题是，使用广泛的传统应用中的PPD，未经许可的草药医学，可能导致的急性和慢性毒性，这是一个重大的生物安全关切（40）可能出现的风险。在我们的研究中，PPD是在微摩尔浓度有效，并没有明显的细胞毒作用在3T3-L1脂肪细胞（图2和3）。以往的研究也报告说​​，PPD可以抑制一些肿瘤细胞株（12 21）的增殖。因此，不同停留时间，PPD公司可能会降低体重增加绝经期妇女，无有害的副作用，包括卵巢癌和乳腺癌。虽然应进行严格检查PPD公司的不利影响，这种化合物是治疗肥胖症的前途代理，并有可能用于治疗其他激素有关的疾病。

前SectionNext SectionDISCLOSURES
清华脂蛋白 没有利益冲突，财务或其他方面，声明的作者。

前SectionNext SectionACKNOWLEDGMENTS
我们非常感谢王乃利请有关实验设计的意见，张雅鸥，孙兵pseudoprotodiocsin，提供实时RT-PCR和间接免疫荧光检测协议。

©2010美国生理学会
上一节中引用
。↵Ambrosino，岩田ţ，ScafoglioÇ，Mallardo中号，克莱因ŕ，Nebreda受体。因子TEF-1和C / EBPbeta主要p38alpha MAPK的调节心肌细胞增殖的转录因子。生化J 396：163-172，2006.CrossRefMedline2↵Aouadi中号，洛朗·K表，PROT中号，乐马尔尚BrustelŸ，Binetruy乙，博斯特F.抑制p38MAPK的增加脂肪细胞从胚胎到成年阶段。糖尿病55：281-289，2006.Abstract/FREE全部文本3：↵Bhathena SJ，贝拉斯克斯吨。在肥胖和糖尿病的饮食植物雌激素的有益作用。研究临床NUTR 76：1191至1201年，全Text4 2002.Abstract/FREE↵Cederroth CR，Vinciguerra中号，阔纳F，ŕ迈达尼，Doerge议员，维瑟的TJ，Foti中号，罗纳-Jeanrenaud F，Vassalli JD，Nef的小号一种植物雌激素丰富的饮食，增加能量消耗，降低肥胖小鼠。环境与健康展​​望115：1467年至1473年，2007.Medline5↵茶Ÿ，律政司司长权，薛琦铉W，金水园。雌激素受体-α介导的雌二醇在人类间质干细胞端粒酶活性的影响。细胞分子26：454-458，2008.Medline6↵张瓦，帕拉中号，Centrella中号，麦卡锡的TL。之间的相互作用的CCAAT增强子结合蛋白三角洲和雌激素受体α控制胰岛素样生长因子I（IGF1）和依赖于成骨细胞雌激素受体基因的表达。基因345：225-235，2005.7↵郑WY，郭张玉海，黄CJ-。新型雌激素化合物在山药块茎（薯蓣阿拉塔CV。台农2号）的分离和鉴定。 J农耕食品化学55：7350-7358，2007.CrossRefMedline8↵蒋HC，王晋江，吴RT。从巴黎枫香七叶莲formosanin C和β-蜕皮激素的水解产物的免疫调节作用。抗癌：1475年至1478年，1992.Medline9：↵库克PS，Naaz A.雌激素在脂肪细胞的发育和功能的作用。进出口生物学与医学（梅伍德）229：1127年至1135年，2004.Abstract/FREE全Text10↵：原因摩根富林明，Korach金水。雌激素受体缺失小鼠：我们学到了什么，在那里他们将带领我们呢？ 1999.Abstract/FREE全Text11。endocr牧师20：358-417，↵Dinchev研发，扬达乙，阿斯拉尼议员Evstatieva L时，Oleszek W科斯托娃一蒺藜甾体皂甙的分布，从不同的地理区域。植物化学69：176-186，2008.Medline12↵董明，冯新征，吴LJ，王本祥，池岛T.两个新的根茎从黄山药和其细胞毒活性的甾体皂甙。足底67：853-857，2001.CrossRefMedline13：↵安格曼晶澳，冰山啊，刘易斯RY，林一，Lisanti MP，舍雷尔体育。组成性激活丝裂原活化蛋白激酶6（MKK6）或水杨酸诱导自发的3T3-L1脂肪细胞。 J BIOL 274：35630-35638，1999.Abstract/FREE全Text14：↵干线的JS，Maratos-干线E.肥胖和下丘脑：小说肽为新的途径。单元92：437-440，1998.CrossRefMedline15：↵弗利EF，Jazaeri机管局，Shupnik马，澳，水稻长波Jazaeri。选择性雌激素受体β在恶性人类结肠损失。癌症RES 60：245-248，2000.Abstract/FREE全Text16↵Gambacciani Ciaponi中号，卡帕格利乙，Piaggesi大号，大号德西蒙娜奥赫朗迪ŕ，Genazzani的AR。体重，身体脂肪的分布，并在早期绝经后妇女激素替代疗法。 J临床内分泌学代谢82：414-417。，1997.Abstract/FREE全Text17：↵Gathercole的LL，Bujalska IJ，斯图尔特下午，汤姆林森JW。人类皮下脂肪组织中胰岛素的糖皮质激素的调制信号。 J临床内分泌学代谢92：4332-4339，2007.Abstract/FREE全Text18↵葛瑞格尔FM，SMAS厘米，Sul的HS。了解脂肪细胞分化。生理学78：783-809，1998.Abstract/FREE全Text19↵古斯塔夫森B，的Gogg小号，小号Hedjazifar，Jenndahl Hammarstedt一个L时，史密斯U。炎症和受损的脂肪细胞在人增生性肥胖。研究生理学内分泌学代谢。297：E999，E1003，2009.Abstract/FREE全Text20↵本间，KurachiĤĤ，西尾Ÿ，武田ţ，山本牛逼，安达ķ，守成ķ，Ohmichi中号，松泽Ÿ，村田Y.雌激素抑制脂蛋白脂肪酶基因的转录。脂蛋白脂酶启动一个独特的雌激素反应元件的存在性。 J生物学化学275：11404-11411，2000.Abstract/FREE全Text21↵诺娃一个，Serly J，Dinchevð，Ocsovszki我，我科斯托娃，莫尔纳J.一些皂甙和蒺藜，菝棕竹酚醛组件的筛选。多药耐药调制器。在体内23：545-550，2009.Abstract/FREE全部Text22↵雅格瓦，Sauerbrei W，贝克é，马森至五，Stumpfe中号，魅儿W，W库恩，Janicke楼的曲普瑞林和他莫昔芬治疗的随机比较。逐步卵巢癌。抗癌15：2639年至2642年，1995.Medline23↵Kumle研究下跌乳腺癌的发病率和减少使用HRT。柳叶刀“杂志372：608-610，2008.CrossRefMedline24：↵权CS，孙某兴业，金SH，金红，子锦，李JS，JK林，金JS。穿龙薯蓣的抗肥胖效果与在啮齿类动物中的脂肪酶抑制活性。 biosci生物工程生物67：14​​51年至1456年，2003.CrossRefMedline25：↵的Laemmli英国。噬菌体T4头的组装过程中结构蛋白的裂解。自然227：680-685，1970.CrossRefMedline26↵廖御用大律师，李元朗，秦银发，夸尔斯劳工处，徐KK，李ŕ，周恒辉，萧ZS的。植物性雌激素genistein通过抑制脂肪细胞分化的细胞外信号调节激酶1/2活性的潜在下调。姚明104 J细胞生化：1853年至1864年，2008.CrossRefMedline27↵林士杰。，王冬梅，杨ð，J，塘，陈大J.液相色谱 – 串联多级粗提取物，从穿龙薯蓣甾体皂甙的表征质谱。肛门詹文献599：98-106。2007.CrossRefMedline28↵Longcope，贝克ŕ，约翰斯顿的CC小。雄激素和雌激素代谢：肥胖的关系。代谢35：235-237，1986.CrossRefMedline29↵MacDougald OA，巷医师。脂肪细胞分化过程中基因表达的转录调控。每年牧师生化64：345-373，1995.CrossRefMedline30↵梅斯的JS，沃森生长激素。性类固醇激素在脂肪组织和肥胖的直接影响。灵魂出窍5：197-216，2004.CrossRefMedline31：↵麦克唐纳民主党。 SERMs的分子药理学。趋势内分泌学代谢，10：301-311。1999.CrossRefMedline32↵Mirkin G.山药中的雌激素。 JAMA 265：912，S，陈炜，百福德国之声，莫布斯简历，杨许继，克莱格的DJ，Kaplitt爵，小川与沉默中的下丘脑腹内侧核雌激素受体α1991.CrossRefMedline33↵Musatov导致代谢综合征。 PROC基因科学美国104：2501年至二五○六年，2007.Abstract/FREE全Text34：↵Narod SA。百万妇女研究卵巢癌和HRT。柳叶刀“369：1667年至1668年，2007.CrossRefMedline35↵西村小号，我真锅，长崎中号，细谷Ÿ，山下藤田Ĥ，Ohsugi中号，砥K表，清华脂蛋白 门胁ţ，ŕ永井，杉浦与肥胖的脂肪细胞需要密切脂肪细胞分化，基质细胞和血管之间的相互作用。糖尿病56：1517年至1526年，全Text36 2007.Abstract/FREE↵Ntambi谟，的年轻Cheul光脂肪细胞分化和基因表达。 J NUTR 130：3122S，3126S，2000.Medline37：↵奥尔森，Hellberg列印，Parini带够，维达尔Ø，Bohlooly YM，Rudling中号，LINDBERG MK，华纳中号，Angelin乙，古斯塔夫森JA。雌激素受体-α缺乏雄性小鼠肥胖和不安脂蛋白。生物化学与生物物理RES COMMUN 278：640-645，2000.CrossRefMedline38↵OKE OL。荫的食品和药品的重要来源。世界牧师营养与饮食15：156-184，1972.Medline39：↵佩希钾，韦伯带够，柯伊伯的GG，尼尔森小号，古斯塔夫森J，库什纳PJ，斯坎伦TS。差的雌激素受体雌激素受体甲型和ERβ配体活化AP1的网站。科学277：1508年至1510年，1997.Abstract/FREE全Text40：↵白é，KT，吴重链可变区Esrason。草药的肝毒性：一个新兴的困境。编移植14：91-96，2004.Medline41：↵Prusty研发，公园，农民SR BH，戴维斯柯。 MEK / ERK信号的激活，促进脂肪细胞3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARgamma）的C / EBPalpha基因表达加强。 J生物学化学277：46226-46232，2002.Abstract/FREE全部Text42↵Rotinen男，，Encio我，Arrazola一个Celay J，阿隆索的MM，比利亚尔研究雌二醇诱导型17β-羟类固醇脱氢酶的表达雌激素受体之间的串扰。 α及C / EBPbeta。 J内分泌学200：85-92，2009.Abstract/FREE全Text43↵赖登男，凡Harmelen至五Jocken J，迪克一个，Hoffstedt J，Wiren中号，大号布罗姆奎斯特，Mairal一个，Langinð，Blaaké，Arner带够。比较研究的激素敏感脂肪酶在人体脂肪细胞脂肪分解的脂肪甘油三酯脂酶的作用。研究生理学内分泌学代谢。292：E1847，E1855，2007.Abstract/FREE全Text44↵柴崎男，高桥ķ，伊藤ţ，宫泽喜一小号，中号伊藤，J，小林BujoĤ，齐藤勇胰岛素敏感性的改变3T3-L1细胞在裸鼠体内植入。为TNF-α的作用？ Diabetologia上45：518-526，2002.CrossRefMedline45：↵Shimabukuro男，小山ķ，陈国，我的王，Trieu F，李Ÿ，Newgard会CB，昂格尔湿度。瘦素通过组织甘油三酯枯竭的直接降糖效果。 PROC基因科学94：4637-4641，1997.Abstract/FREE全Text46↵歌我，吕氮，金克朗，权金水，柳镱，金红，李SW，宋JH，李JH，李SK善年，刘某DG，公园BH权KB。水提物山药Tokoronis的高脂肪的饮食诱导小鼠肥胖的减重活动。 J MED食品12：304-309，2009.CrossRefMedline47↵施皮格尔曼骨髓，新干线的JS。肥胖和能量平衡清华脂蛋白 的调节。 104：531-543细胞，2001.CrossRefMedline48↵Wakeling曝光。的不同类别antioestrogens的行动模式的异同和区别。 endocr 1.902癌症7：17-28，2000.CrossRefMedline49：↵Wijayaratne铝，内格尔SC，佩奇洛杉矶，克里斯滕森的DJ，诺里斯JD，Fowlkes马克，麦克唐纳DP。抗雌激素之间的机械差异比较分析。内分泌科140：5828-5840，1999.Abstract/FREE全Text50↵吉川男，徐F，森川ţ，PongpiriyadachaŸ，小号村，麻生Ÿ，Kumahara一，松田H.药用花卉。 （1）十二）新类型spirostane甾体皂甙与从Borassus flabellifer antidiabetogenic活动。化学医药通报（东京）55：308-316，2007。 CrossRefMedline«上一页|下一篇»

以往的研究表明，C / EBP和-δ的MDI的感应可以调解PPARγ和C /EBPα的转录（29）后引起的转录因子。在这里，我们评估C / EBP和δ2和第5天的mRNA水平。正如图所示。 8B，PPD在C / EBP和δ在第2天可以取消ICI 182,780 mRNA水平降低，而导致的PPD产生在5天无显着影响。正如图所示。 8C，PPD也造成了一些消极监管的脂肪细胞，如前-1，GATA – 结合蛋白2，GC诱导亮氨酸拉链蛋白和C / EBP同源蛋白（CHOP方案-10），也可以是感应ICI 182,780逆转。

清华脂蛋白价格 雌激素受体依赖性抑制MAPK信号通路通过的PPD。
MAPK信号通路参与脂肪细胞，ERK1 / 2的磷酸化和p38在脂肪细胞分化的关键事件（2 26）。审查上ERK1 / 2和p38的PPD的影响，2日postconfluent 3T3-L1细胞分化使用MDI协议，细胞与DMSO（0.1％DMSO）或2μM的PPD公司在发病分化（cotreated的0天），并维持48小时。细胞裂解物进行了分析，用抗磷酸化ERK1 / 2抗体或抗磷酸化p38抗体，检测磷酸化ERK1 / 2和P38，分别免疫。正如图所示。 8D，PPD诱导3T3-L1细胞中的p38的磷酸化。 ICI 182,780 3T3-L1细胞治疗抑制p38的PPD诱导的磷酸化。相比之下，分子机转的PPD没有改变在脂肪细胞分化显着（图8E）ERK1 / 2磷酸化。

吡格列酮对的PPD antiadipogenic的效果。
我们还确定了PPARγ的核激素受体，调节脂肪细胞，并表示在脂肪细胞分化（18）蛋白表达的PPD的影响。为期两天的postconfluent 3T3-L1细胞分化使用MDI的协议，与细胞分化（0天）的发病与DMSO（0.1％DMSO）或2微米的PPD cotreated，并保持48小时。而MDI的强烈表达细胞PPARγ的处理，加剂cotreated细胞表达PPARγ的少，可以通过治疗ICI 182,780（图8D）获救。然而，PPARγ激动剂吡格列酮，没有抢救PPD（图8E）antiadipogenic行动，表明其行动的直接现场是不PPARγ的受体。

上一页SectionNext SectionDISCUSSION
在本研究中，我们特点的一种自然产生的活性化合物，从穿龙薯蓣的PPD，使用脂肪细胞在体外和体内实验系统的影响。利用3T3-L1细胞系在体外脂肪细胞模型表明，治疗与PPD造成在减少脂肪的形成，提高ERα表达的总金额，并在细胞核中ERα的积累增加。此外，在体内移植治疗的PPD也阻碍了在裸鼠体内的脂肪垫形成的3T3-L1细胞。我们的数据表明，PPD是穿龙薯蓣的活性化合物，有助于植物减重活动。据我们所知，这项研究是首次揭示脂肪形成的PPD的影响。

甾体皂甙的外部分布在植物中，一些具有结构相似性类固醇激素。因此，他们也可能影响性类固醇激素受体，特别是雌激素受体，使他们能够直接影响（30）。在本研究中，前脂肪细胞postconfluent扩张和随后的分化抑制作用的PPD ICI 182,780减弱。作为一个强有力的甾体类抗雌激素，ICI 182,780可以结合这两种ER亚型（48）。然而，ER表达在睾丸和传出小管的研究还表明，ICI 182,780降低ERα的表达，但不ERβ的。 ICI 182,780下调ERα的蛋白被认为是在ERα的构象，从而导致了受体的快速损失（49）的变化所造成的。我们目前的研究中，ICI 182,780击倒在ERα和-β的PPD诱导表达，而只有ERα的是敏感的PPD治疗（图7）。虽然ERα和ERβ组织分布重叠，分子机制可能解释ERα和ERβ在不同的角色，包括其配体的亲和力和转录的差异，不同的辅助因子相互作用，推测异二聚体（5）。在这项研究中，PPD引发ERα的mRNA和蛋白表达的增加，以及在细胞核中ERα的积累，清华脂蛋白价格 而没有ERβ表达或本地化的效果（图7）。虽然在脂肪细胞中表达ERα和ERβ，ERα的主要表达亚型（22）。成熟，男性ERα的缺失小鼠和双（ERα/ERβ的）基因剔除小鼠增加体重和脂肪组织伴随较高水平的胆固醇和瘦素，传感器，高热量的供应（37）。此外，雌二醇诱导雌激素受体α介导的转录抑制脂蛋白脂肪酶，这种酶能够catabolizes血浆甘油三酯（20）。我们的研究结果与以往的工作指出PPD抑制LPL和瘦素mRNA的表达升高的一致。此外，成脂转录因子（图8，A和B）和一些负面监管的脂肪细胞（图8C）也发生了变化的PPD。相比之下，ERβ的缺陷小鼠与野生型小鼠（37）相比正常体重和脂肪组织。这些研究清楚地表明，ERα的，但不ERβ的，是一个白色脂肪组织的监管。这一发现可能部分解释为什么，结果，PPD对雌激素受体β亚型（图7）没有影响。然而，以往的研究也表明，脂肪组织和ERα的缺陷的动物，有1卵巢切除身体的重量减少，表明ERβ在脂肪细胞可能参与（15）。 ERβ表达格局并没有改变的PPD治疗为什么原因是待定。潜在的，PPD可能ERα的选择，因为它的构象结构可能更容易绑定到ERα的。这种雌激素受体亚型的选择性诱导，还可以提供线索，以确定在其他植物雌激素受体选择性化合物。

它是公认的激素调节脂肪细胞通过MAPK途径，特别是ERK1 / 2和p38信号通路（2 26）。短暂激活MEK / ERK信号通路，在脂肪细胞分化的早期阶段，可能需要促进分化过程（41）。 p38蛋白还需要为脂肪细胞，p38活化，促进脂肪细胞的自发分化（13）。目前的研究中，我们观察到，同时ERK1 / 2和p38磷酸化的MDI诱导后升高。然而，只有磷酸-P38是下调的PPD，ICI 182,780可逆转的，这表明p38蛋白也可能参与PPD的雌激素受体依赖的抗脂效果。

因为PPD公司只起到了重要作用，在发病的脂肪细胞（图4A），我们建议，PPD可能对在第72聚脂Ĥ发生的一些事件的影响。以往的研究表明，ç/EBPδ和C /EBPβ转录后暴露的脂肪细胞诱导分化鸡尾酒（29）作为第一因素。此外，ç/EBPδ和β的活动，调解表达PPARγ和C /EBPα的，这两个MDI刺激（29）后增加。正如图所示。 8B，PPD导致mRNA水平降低，C / EBP和δ2天。它表达C / EBP-δ的5天，虽然他们的水平下降产生任何影响。因此，的PPD antiadipogenic的效果可能会通过C / EBP和-δ的介导，在PPARγ的减少和C /EBPα（图8A）。研究还表明，或β-雌激素受体α和C /EBPδ，可以互动，形成一个复杂的，可以抑制其转录（6，42）。据此前报道，P38蛋白激酶也能调节C / EBP转录活动（1）。因此，ERα和磷酸化的p38的PPD诱导沮丧的表情，可能直接导致减少的C /EBPδ或-β的转录活性。这将触发级联下调PPARγ的，C /EBPα的，在聚脂相关的其他基因。此外，PPD的时间限制的影响，也可能是由于其postconfluence脂肪细胞膨胀的抑制作用。在脂肪细胞分化过程中，有丝分裂postconfluent脂肪细胞的克隆扩增是其进一步分化成脂肪细胞介导的​​构象变化在chromatosome（18）清华脂蛋白价格 的先决条件。这有利于脂转录因子在脂肪细胞分化的早期阶段（18）绑定自己的模板。此外，与吡格列酮的分子机转，PPARγ激动剂，没有抑制的PPD antiadipogenic的效果，表明PPARγ的是不是一个PPD的直接目标。所以PPD可能会影响激活PPARγ的前脂肪细胞分化。的PPD时间限制的效果也可以部分解释为什么PPD公司在很短的窗口处理时发挥作用，即PPD两个早期阶段的转录因子C / EBP-δ的行为。它也能抑制脂肪细胞的有丝分裂克隆扩增。

PPD公司在ER依赖性抑制脂肪形成。
使用MDI协议为期两天的postconfluent 3T3-L1细胞分化，细胞与DMSO（0.1％DMSO）或PPD cotreated，剂量范围从0到4微米，在分化（0天）的发病和维护48小时。正如图所示。 6A，我们观察到了PPD的剂量依赖性抑制作用。此外，加剂处理的细胞中积累的控制细胞内的甘油三酯含量约30-80％，两油红O染色（图6B）和甘油三酯的积累（图6C）所示。此外，的PPD antiadipogenic的影响是可以逆转的，雌激素受体拮抗剂ICI 182,780。和ICI 182,780单单是不够的，以促进分化。
在这个页面调进一个新的窗口
下载为PowerPoint SlideFig。 6。
的PPD抑制脂肪细胞中的雌激素受体（ER）的依赖性。工业，使用MDI协议分化的细胞，二甲基亚砜，没有分化的诱导培养基的车辆，分化与二甲基亚砜介质。我们探讨了使用油红O染色法（顶部的脂肪细胞的PPD效果：油红O染色细胞的微观角度，底部：宏观染细胞在24孔板;栏= 10微米），在510 nm处的OD（B），总甘油三酯（TG）含量（C）的定量分析。结果为手段±标准差（每组n = 8）。在每次实验中，PPD是ICI和指示的手段之间的统计学显着性差异性（P≤0.05）在不同的字母（A，B，C，D）的存在或没有增加。

加剂诱导ERα的表达和核ERα的积累。
雌激素的主要生物效应的研究发现，两种截然不同的细胞受体，ERα和ERβ，似乎有重叠，但不同的角色（39）。因此，进行实验，以确定是否PPD可以改变计划的表达模式。为期两天的postconfluent 3T3-L1细胞分化使用MDI的协议，与细胞分化（0天）的发病与DMSO（0.1％DMSO）或2微米的PPD cotreated，并保持48小时。在3T3-L1采用实时RT-PCR和免疫细胞，这两种形式的ER检测ERα的蛋白量显着增加对PPD（图7，A和B）。这在ERα的mRNA和蛋白量的PPD诱导增加平行中积累的ERα在细胞核的增加，这是用间接免疫荧光定量分析和核比胞浆荧光监测（图7 ，C和D）。与此相反，既不ERβmRNA的量和蛋白质也不3T3-L细胞，亚细胞定位改变与PPD治疗。
在这个页面调进一个新的窗口
下载为PowerPoint SlideFig。 7。
PPD对雌激素受体亚型。二甲基亚砜，没有分化的诱导，车辆中等，分化与二甲基亚砜介质。实时RT-PCR（A）免疫（二），间接免疫荧光法（栏= 10微米），定量分析和核细胞质荧光（清华脂蛋白多少钱 |四）对雌激素受体亚型的比例显示选择性的表达升高和核ERα的积累的PPD。在A，相对mRNA水平正常化GAPDH的，和值从DMSO（0.1％DMSO）处理每一个基因的细胞被定义为1。结果为手段±标准差（每组n = 8）。在每次实验中，PPD ICI的存在或不存在的情况下在不同的字母表示（A，B，C）之间的手段统计学意义的差异性（P≤0.05）。ER依赖通过的PPD脂肪细胞分化相关基因的调控。
我们研究中聚脂相关基因的mRNA水平的PPD的效果。为期两天的postconfluent 3T3-L1细胞分化使用MDI的协议，与细胞分化（0天）的发病与DMSO（0.1％DMSO）或2微米的PPD cotreated，清华脂蛋白多少钱 |并保持48小时。正如图所示。 8A，LPL mRNA水平，瘦素，C /EBPα的，并在第8天PPARγ的显着下调的PPD，而治疗与ICI 182,780，取消这个效果。这些基因在控制细胞的水平，与以往的研究表明，这些基因的表达水平增加，细胞分化对终端脂肪状态（18，20，37）一致

油红O染色清华脂蛋白效果
3T3-L1脂肪细胞用PBS洗，用PBS（pH 7.4）中，10％的甲醛固定，0.5％，油红O染色

甘油三酯含量
在天8-9 3T3-L1细胞分化后，用PBS洗，刮冰在100毫升的盐水（2 M氯化钠，2毫米EDTA，50 mM磷酸钠，pH值7.4），超声均质细胞暂停，如前所述（45），总甘油三酯（总局的Trinder; Sigma）检测。结果表示为每细胞蛋白总甘油三酯（DC蛋白测定; Bio-Rad公司，大力士，加利福尼亚）。

实时RT-PCR
提取总RNA，用Trizol（Invitrogen公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州）。共有2μg总RNA逆转录使用的标第一链合成系统（Invitrogen公司）。从孤立的RNA合成cDNA，周期时间（CT）值与电源的SYBR Green PCR扩增预混（应用生物系统公司的Foster City，CA），在ABI PRISM 7300序列检测系统和分析软件，利用实时PCR （Applied Biosystems公司），（4）如前面所述。使用Applied Biosystems公司Primer Express软件（2.0版），设计引物，引物序列见表1。

查看此表：
在此windowIn一个新windowTable 1。
引物用于实时RT-PCR分析

免疫印迹分析
冷PBS洗涤细胞两次与1 mM的正钒立即放置在样品缓冲液[1％Nonidet的P-40，20毫米的Tris·盐酸（pH值8.0），150 mM氯化钠，1 mM的EDTA，0.1％NaN3的10 mg / ml的抑肽酶，清华脂蛋白效果 胃蛋白酶抑制剂1毫米，16.4 mg / ml的亮肽素，1的毫米phenylmethylsulfonylfluoride（PMSF），四氧嘧啶0.1毫米，2％的SDS，10％的甘油没有二硫苏糖醇（DTT）。裂解物被加热，蛋白质浓度增加了100毫米的DTT之前确定。蛋白浓度测定使用Bio-Rad公司的DC蛋白测定试剂盒，牛血清白蛋白作为标准。样品在95℃加热5分钟，10％的SDS-PAGE分离，并用免疫印迹分析，如前所述（25）。与ECL试剂盒研制的免疫印迹。

间接免疫荧光法
实验室的TEK室幻灯片（NUNC，内珀维尔，IL）培养3​​T3-L1细胞用PBS洗，用PBS（pH值7.4）的10％甲醛固定。 0.3％的Triton 15分钟在室温下增加渗透在PBS X-100的细胞治疗。阻塞在PBS的10％正常山羊血清室温1小时后，细胞模型，筛选，使用标准的间接免疫荧光染色过程中使用ERα的或ERβ的多克隆抗体（1:200）和FITC标记的羊抗兔抗体（1:200）作为第二抗体（Santa Cruz公司）。间的荧光定量分析进行了使用图像的Pro Plus软件（6.0版）。核细胞质荧光的比率计算，并表示为平均值±SE。

从头脂肪形成模型
在这项研究中使用的所有小鼠在符合由中国动物保健理事会成立的实验室动物照顾和使用的指导方针来处理，所有动物的协议，由清华大学动物护理和使用委员会的批准。 3T3-L1细胞接种在6孔板。为期两天的融合细胞治疗在2μM的PPD公司，然后胰酶消化和含10％胎牛血清的DMEM暂停2天，细胞的存在或不存在。离心后，细胞颗粒悬浮于PBS，皮下注射6周龄裸鼠BALB / C裸鼠背上后，其中107个细胞（500μL）。我们已经多次注射的PPD处理的PPD未经处理的细胞，每星期为期6周。细胞生长和发展成成熟的脂质拉丹在未来3-4周脂肪垫。在植入6周后，小鼠通过吸入metofane的麻醉，切除的脂肪垫。相邻的皮肤和皮下肌肉组织被拆除。插头固定过夜，和移植进行称重和分析组织作为以前（44）。两组小鼠，小鼠的PPD处理和未处理加剂裸鼠，进行了调查。

组织学
清华脂蛋白效果 标本固定在一夜之间在10％福尔马林，脱水，石蜡包埋。节（5毫米），苏木精伊红（H＆E）染色检查。照片是在光学显微镜下（奥林巴斯BH-2）。

统计分析
数据表示为平均值±SE的。使用学生的t检验，P <0.05认为显著评估手段之间的差异的意义。与邦弗朗尼更正单向ANOVA被用来确定多重比较的意义。使用统计软件SPSS（11.0版）进行了计算。

前SectionNext SectionRESULTS
PPD对3T3-L1细胞增殖的影响
PPD没有preconfluent脂肪细胞增殖的影响。
对于终端到脂肪细胞的分化取决于前和postconfluent脂肪细胞的增殖（29）。我们首先确定是否PPD影响preconfluent脂肪细胞的增殖。的PPD，剂量范围从0到4微米，增加了电镀时间，并测定细胞增殖，在成长过程中的几个点。正如图所示。 2A，PPD没有3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。通过引入ICI 182,780（雌激素受体拮抗剂），我们也表明PPD的作用在缺乏这种分化的早期阶段并不依赖于缺乏雌激素受体。正如图所示。 2B，虽然所有的细胞随着时间的推移LDH，大约90％的LDH的释放在72小时比24小时的PPD没有显著诱导在任何实验中的时间点，每个细胞LDH释放与DMSO（0.1％DMSO ）细胞。

清华脂蛋白价格 | 清华脂蛋白效果 | 清华脂蛋白怎么样 | 清华脂蛋白多少钱 | 百度地图 |

Copyright (c) 2011 清华脂蛋白 | Designed by
查看大图：
在这个页面调进一个新的窗口
下载为PowerPoint SlideFig。 1。
从穿龙薯蓣（PPD）的pseudoprotodiocsin结构分离。

上一页SectionNext SectionMATERIALS方法
物料
pseudoprotodiocsin（CAS登记没有。102115-79-7），请提供王乃利博士（天然产物化学系，沉阳药科大学）。所有的组织培养材料自GIBCO（大岛，NY）。胰岛素，地塞米松，3 – 异丁基-1 – 甲基自Sigma（圣路易斯，密苏里州）。多克隆抗雌激素受体α，兔多克隆抗-ERβ的单克隆抗磷酸化p38，鼠标，鼠标单克隆抗磷酸化ERK1 / 2，鼠单克隆抗过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）-γ的小鼠单克隆抗GAPDH的FITC标记的抗兔，辣根过氧化物酶标记的抗体及蛋白质的A / G PLUS琼脂糖珠从圣克鲁斯生物技术（圣克鲁斯，加利福尼亚州）。增强化学发光（ECL）检测试剂盒是从Amersham Pharmacia公司，生物技术（皮斯卡塔韦，新泽西州）。

细胞培养
在DMEM培养3T3-L1前脂肪细胞（由香港城市大学获得），辅以10％（体积/体积），小牛血清，100 U / mL青霉素，链霉素100毫克/毫升，在37°C和1毫米丙酮酸在95％空气，5％CO2。诱导分化，为期2天的postconfluent 3T3-L1前脂肪细胞刺激3 – 异丁基-1 – 甲基0.5毫米，1μM的地塞米松，5μg/ ml的胰岛素（MDI），它被添加到培养液，10％与72小时FBS的培养基。第3天，MDI中更换培养液，10％FBS，5微克/毫升胰岛素。第6天，5微克/毫升胰岛素的培养液，10％胎牛血清的DMEM培养液，10％FBS，这是改变，直到分析8-9天，每2天更换。

浓度的PPD
在初步实验中，我们评估的PPD的细胞毒性，用比色法细胞毒性试验（CytoTox 96非放射性细胞毒试验; Promega公司）。超过10μM浓度的PPD导致3T3-L1细胞中显着的细胞毒作用。因此，我们的PPD浓度设置为0，1微米，2微米，4μM的。改组的PPD在DMSO原液10毫米，过滤消毒，并储存在-20°C对于每个实验，细胞培养基预混的PPD。

增殖试验
preconfluent 3T3-L1前脂肪细胞接种在96孔板100μL培养基，每孔10000个细胞的密度。 PPD公司，在剂量范围从0至4μm，加入到培养基中。在实验结束后，比色法增殖试验[细胞增殖包（MTT），罗氏诊断，德国曼海姆]制造商的指示进行。计算各剂量和时间点的吸光度值从6井含有细胞的平均吸光度，平均吸光度减去空白孔（含在培养基中，但没有细胞的PPD）。

细胞毒性实验
preconfluent 3T3-L1前脂肪细胞接种于24孔板，在1毫升或每口井的语言，在6孔板在13万细胞密度在2毫升每口井的语言，在50,000个细胞的密度。 PPD公司，在剂量范围从0到4微米，无酚红培养基或无细胞。在实验结束后，从井中取出介质，并储存在4°C其余的每个细胞单层37°ÇPBS洗涤三次，并在1毫升溶解液（0.05％海卫PBS-100），每孔细胞刮冰。裂解物被保存在4°，直到色度细胞毒性试验℃（CytoTox 96非放射性细胞毒试验）制造商的指示进行。计算公式如下：％乳酸脱氢酶（LDH）释放％LDH释放= [培养上清中/ LDH（培养液中LDH的细胞裂解液LDH）]×100。

应当强调的是，虽然LDH释放每增加细胞扩张，总LDH含量（细胞裂解液中培养上清液+ LDH LDH），每孔细胞数的比例也增加。因此，图显示％的LDH释放。 2B，3B，4B是不相关的细胞数量，但它可以直接反映每个细胞LDH释放％。

查看大图：
在这个页面调进一个新的窗口
下载为PowerPoint SlideFig。 2。
PPD的对preconfluent 3T3-L1前脂肪细胞增殖和细胞毒作用。分别加入不同剂量的PPD在电镀时间。细胞增殖程度（A，作为控制的百分比表示）和PPD的细胞毒性[b]％的乳酸脱氢酶（LDH）释放表示在不同时间点进行了检查。 ICI 182,780（ICI），单独或与2μM处理细胞增殖的PPD也评价。结果为手段±标准差（每组n = 8）。二甲基亚砜，0.1％的DMSO处理的细胞。在每次实验中，不同的字母表示（A，B）之间的手段统计学意义的差异性（P≤0.05）。

查看大图：
在这个页面调进一个新的窗口清华脂蛋白怎么样
下载为PowerPoint SlideFig。 3。
PPD的3T3-L1期间postconfluent有丝分裂克隆扩增细胞的增殖和细胞毒作用。为期两天的postconfluent 3T3-L1细胞培养在MDI中与2微米的存在或缺席的ICI的PPD cotreated。工业，使用MDI协议分化的细胞，二甲基亚砜，没有分化的诱导培养基的车辆，分化与二甲基亚砜介质。 （分化开始被指定为第0天），在3天的细胞增殖（一，作为控制的百分比表示）和PPD的细胞毒性（乙，表示为％LDH释放）的程度进行审查。结果为手段±标准差（每组n = 8）。在每次实验中，不同的字母表示（A，B，C，D）之间的手段统计学意义的差异性（P≤0.05）。

obesityDioscorea蓣Makinosteroid皂素
肥胖已密切相关，清华脂蛋白与性激素的平衡（28）。绝经后妇女表现出的特点腹部体重增加，卵巢切除后雌性啮齿动物展示增加的体重和脂肪储存。这些影响是可以预防的，使用激素替代疗法（HRT的;点评47号）。从人类和实验动物的证据已经证明了举足轻重的作用，雌激素和雌激素受体（ERS）脂肪的形成和代谢。有两种异构体的雌激素受体ERα和ERβ。一些研究表明，这两种ER亚型中脂肪的形成和代谢功能。男性和女性的雌激素受体α缺陷小鼠，以及芳香化酶基因敲除小鼠，拥有超过野生型对照的50-100％的脂肪组织。这似乎是由于两种脂肪细胞的数量和规模的增加，表明ERα在脂肪细胞的生长和增殖（10）中的作用。雌激素也被发现抑制表达雌激清华脂蛋白素受体α（20）的脂肪细胞脂肪堆积。此外，在人类和动物的多项研究表明，植物雌激素，在结构，雌激素类似，可以起到有益的作用，在减轻肥胖和改善血糖控制（审查见参考文献3）。停留时间也出现减少中央肥胖程度（16）;然而，在绝经后妇女，HRT可能导致乳腺癌和子宫肿瘤进展（23，34），这限制了它的应用程序。因此，针对与肿瘤细胞增殖活性的化合物，缺乏急诊室，清华脂蛋白可能是一个合适的方法来治疗相关的内分泌疾病（31），也可能作为一个减重疗法适用。

薯蓣植物，清华脂蛋白又称山药，是在热带地区的重要农作物，在非洲，亚洲和大洋洲（38）的部分地区的大块茎生长。在中国，从穿龙薯蓣提取皂甙已被用于治疗冠状动脉心脏病，哮喘，类风湿关节炎，高血脂，以及源激素的甾醇合成的前体（8，50）作为一个民间医药。从清华脂蛋白康的绝经后妇女（32）。最近，研究也显示，薯蓣植物具有抗肥胖效果。权和他的同事（24）报告，只SD大鼠喂食高脂肪食物，含有5％穿龙薯蓣和40％的牛脂获得显着减少的体重和脂肪组织，在8比对照组动物喂食高脂肪的饮食周实验期间（24）。另一种植物薯蓣，山药Tokoronis，清华脂蛋白也影响肥胖，它的活动是在抑制固醇调节元件结合蛋白1依赖性脂肪合成通路（46）部分。然而，薯蓣及其活性化合物的减重活动的基本机制尚不完全清楚。

1998年11月21日，清华大学清华注册商标证书。商标自注册已经由清华大学和使用仍然有效。然而，北京水木博众科技发展中心和洛阳清华博众生物科技有限公司未经清华大学，锐步齐格燃料妇女，一致认为，自2003年以来，保健品研发和生产的长期使用字

此外，洛阳清华博众生物技术有限公司的商标

清华大学，被告擅自使用原告的行为对原告的商标专用权，注册商标。

清华脂蛋白
开发和生产，两被告的上市时间，数量庞大的销售，锐步Reeinspire二妇女，销售范围广，价格昂贵，两被告带来了巨大的非法利益。由于多次受到当地医药部门的处罚，两被告的产品的广告在同一时间，清华大学的声誉造成巨大损害。

清华大学，要求两家公司停止侵权，赔礼道歉，并赔偿50万元。

北京水木博众受访者表示，内部和外部的产品和包装说明和其他材料的批准和注册

被告还认为，由清华大学，清华大学提交的，都远远低于短期不会误导公众的行为。

洛阳清华博的企业名称中的公共生物技术公司，清华大学，清华大学，事实和法律依据的要求不侵犯商标权。该商标应受到保护，但名称的权利应受到保护。

“
●链接

清华大学清华商标经核准的服务范围：学校（教育），函授课程，锐步光滑的健康的女性，培训，教育，信息，组织竞赛（教育或娱乐），安排和组织会议，，组织文化或教育展览，收费图书馆，图书出版，在线电子书籍和杂志出版，在线电子出版物（非下载），视频发布。

份额：欢迎发表评论我要微博推荐|今日微博hotTopics的相关文章：

两被告的时间推向市场的开发和生产，重要的事实，了解计算机的安全性，大量的销售，louboutin巴夏喀，销售范围广，价格昂贵，两被告带来了巨大的非法利益。由于多次受到当地医药部门的处罚，两被告的产品的广告在同一时间，清华大学的声誉造成巨大损害。

“
1998年11月21日，清华大学清华大学注册商标证书。商标自注册已经由清华大学和使用仍然有效。然而，阿伯克龙比，北京水木博重点技术开发中心和洛阳清华博众生物技术有限公司，奥克利巴夏喀有限公司。如果没有清华大学，一致认为，自2003年以来，在其R＆D的健康保健产品生产和长期使用的词语
洛阳清华博生物技术公司，在企业名称的公共不侵犯商标专用权，清华大学，全免费的PS3游戏 – 如何让他们，清华大学，事实和法律依据的要求。商标应受到保护，但名称的权利应受到保护。

此外，洛阳清华博众生物技术有限公司。商标

百所著名大学，在实践中，
●链接
清华脂蛋白

清华大学，要求两家公司停止侵权，乔丹FEMME，赔礼道歉，并赔偿500，奥克利，故障排除视频卡由奥的斯f。库珀sideroad_1315，000元。
清华大学，被告擅自使用原告的行为对原告的商标专用权，注册商标。
被告还认为，由清华大学，清华大学提交的，都远远短，不会误导公众的行为。

北京水木博众受访者表示，内部和外部的产品和包装说明和其他材料的批准和注册
清华大学清华商标经核准的服务范围：学校（教育），louboutin，函授课程，培训，教育，信息，阿伯克龙比米兰，组织竞赛（教育或娱乐），空气约旦，安排和组织会议，组织文化或教育展览，收费图书馆，图书出版，在线电子书籍和杂志出版，在线电子出版物（非下载），视频发布。

詹姆斯·汉密尔顿博士 清华脂蛋白多少钱
博士哈亚Herscovitz
我们的实验室着重于极低密度脂蛋白（VLDL），低密度脂蛋白（LDL），心脏疾病和中风的发病机制中发挥重要作用的前体的组装和分泌的调节机制。

VLDL的组装是非常大的糖蛋白，具有独特的能力，招收大量的甘油三酯（TAG）的载脂蛋白B发起。利用生化，细胞和分子生物学的方法，我们有特点的N-末端脂蛋白域（不正常分泌脂蛋白的转染细胞表达）的能力，结合形式脂蛋白磷脂和TAG。因此，N-末端的17％（载脂蛋白B-17）招收很少的脂肪，主要分泌脂质穷人，N-末端的41％（载脂蛋白B-41）组装成标记丰富的脂蛋白。尽管如此，载脂蛋白B-17有能力结合形成富含脂质颗粒在体外的磷脂。此外，它紧密结合和不可逆转的乳液，造型丰富的标记脂蛋白。了解组装成极低密度脂蛋白，载脂蛋白B的分子细节将最终使我们制定的手段来调节分泌的极低密度脂蛋白水平，从而减少心脏疾病和中风的风险。

C.詹姆斯·麦克奈特博士

该的麦克奈特实验室是在各种包括载脂蛋白B（APOB），低密度脂蛋白的蛋白质成分（LDL）的蛋白质的结构和功能和折叠感兴趣。低密度脂蛋白是“坏胆固醇”的转运，临床，低密度脂蛋白水平升高与动脉粥样硬化有关。我们使用的生物物理，分子生物学和计算方法相结合，调查和模拟这个非常大的蛋白质N-端区域。我们的长远目标是了解和发展，调节低密度脂蛋白的前体分泌的药物。

载脂蛋白B与N-端41％形成了脂蛋白颗粒模型。 ApoB的蛋白质色带所示​​，显示在空间填充表示表面磷脂，甘油三酯/胆固醇酯的核心是一个黄色的球所示。

 清华脂蛋白
G.格雷厄姆希普利博士
我们的研究集中于膜受体，如低密度脂蛋白（LDL）受体的结构研究。我们的研究都集中在全长的低密度脂蛋白受体，与任何洗涤剂溶解或囊泡重组形式的跨膜结构域。这些研究导致低密度脂蛋白受体的低分辨率描述。未来的研究主要是对改进更高分辨率的低密度脂蛋白受体与它们之间的相互作用的细胞外配体结合域的结构描述。低密度脂蛋白受体的胞外结构域的结构将有利于受体和低密度脂蛋白受体的相互作用分析结构的研究。
 清华脂蛋白
我们研究的方向是：（1）使用金标记的低密度脂蛋白受体和低密度脂蛋白受体胞外域，本地化的低密度脂蛋白受体结合域使用cryoelectron显微镜/单粒子方法;（2）工程的C-末端半胱氨酸残留在表达低密度脂蛋白受体胞外域（3）使用C-末端的半胱氨酸结合的低密度脂蛋白受体胞外域直接酰亚胺脂单层表面或间接酰化/烷基化半胱氨酸残基的脂质膜; （4）执行导向的低密度脂蛋白受体和电子显微镜的2-D阵列结构的研究;（5）使用面向外域绑定和低密度脂蛋白东方电子显微镜的结构研究;（6）使用CD光谱仪，扫描和滴定热，定义的二级结构，构象和人类低密度脂蛋白受体，其表达的细胞外的子域展开清华脂蛋白价格 | 清华脂蛋白效果 | 清华脂蛋白怎么样 | 清华脂蛋白多少钱